ホウレンソウ'次郎丸'の若い無菌実生の葉を0.5Ｍマンニトールに浸漬後，0.1％ベクトリアーゼＹ-23，0.3％セルラーゼオノズカＲＳ，ＣＰＷ塩および0.5Ｍマンニトールを含む酵素液で4時間処理し，プロトプラストを単離した．プロトプラストの分裂は， 5mg／ℓＢＡおよび1mg／ℓ2，4-Dを含む1／2ＭＳ培地で最も効果的で多くのコロニーが形成された．培養1ヵ月後，形成されたコロニーをカルス形成培地に移植した．不定芽は，カルス形成培地1mg／ℓＢＡと10mg/ℓＮＡＡで，再分化培地が1mg／ℓカイネチンまたは5mg／ℓゼアチンの2区，カルス形成培地が5mg／ℓＢＡと5mg／ℓＮＡＡで，再分化培地が5mg／ℓＢＡの区，カルス形成培地が5mg／ℓＢＡと10mg／ℓＮＡＡで，再分培地が1mg／ℓカイネチンの区の計4種類の組み合わせで得られた．

再分化した不定芽を1mg／ℓIAAまたはIBAを含むMS液体培地へ移植すると，移植後約1ヵ月で不定根が得られた．