ホウレンソウ葉肉組織から効果的にプロトプラストを単離し,培養する方法を検討した．無菌的に育成したホウレンソウ'次郎丸'の根部を取り除き,葉肉組織を細断した後,酵素液(0.1%ペクトリアーゼY23,0.3%セルラーゼオノズカRSを含むCPW9M)で処理を行うと,損傷を受けて壊れるプロトプラストが多かった．しかし,細断せずに酵素処理を行い,CPW21Sでプロトプラストを精製すると,健全で活性の高いプロトプラストが多数得られた．次に,プロトプラストの培養条件について実験を行った．プロトプラストの分裂率は培地のpHによって差がみられ,分裂が最も旺盛だったのはpHを5.8に調整した培地であった．プロトプラスト収量は供試材料の成育日数が増すと増加したが,分裂率は播種後10-15日で最も高かった．収量と分裂率の結果から,最もプロトプラストの培養に適しているのは播種後10-15日の材料であった．プロトプラストの培養密度が1.0×10⁵protoplasts/mlで最も分裂率が高く,密度が低下すると分裂率が顕著に減少する傾向があった．